原代分離細胞培養(yǎng)是指從供體內(nèi)取出組織后，經(jīng)機械以及消化分離成單個細胞或單一型細胞群，使之在體外模擬人體生理環(huán)境，在無菌、適當溫度和一定的營養(yǎng)條件下，生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)細胞常有不同的細胞成分，生長緩慢，ELISA試劑盒但是更能代表所來源的組織細胞類型和表達組織的特異性特征。利用原代細胞培養(yǎng)做各種實驗，如藥物測試、細胞分化及病毒學(xué)方面的試驗效果很好。其操作步驟如下。
(1)無菌操作：細菌或霉菌污染是培養(yǎng)失敗的常見原因，必須加強各個環(huán)節(jié)的無菌操作觀念，以預(yù)防為主，一旦污染，一般很難消除。 
(2)培養(yǎng)液：所用的培養(yǎng)液必須滿足細胞生存和生長的必要條件。由于細胞來源的動物種類、組織類型不同，對培養(yǎng)液的要求有一定的差異，ELISA試劑盒必要時可用預(yù)實驗的方法選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)液。
(3)小牛血清：小牛血清對于維持培養(yǎng)細胞的生存和促進細胞增殖起著關(guān)鍵性作用?？蛇x擇多種不同批號的小牛血清進行小樣分析。一旦確定某一廠家的某一批號小牛血清后，就保持應(yīng)用至實驗完成。
(4)膠原酶溶液：必須新鮮配制，貯存時間過長(即使是-20℃低溫保存)，也將影響消化效力，導(dǎo)致消化時間過長，細胞損傷增加。
(5)L-谷氨酰胺：幾乎所有細胞對谷氨酰胺都有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時，細胞會因生長不良而死亡。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，加有谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱貯存兩周以上時，就應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。
(6)靜置培養(yǎng)：原代細胞在消化分離后，置于CO2培養(yǎng)箱的頭24～48h (必要時72h)內(nèi)，應(yīng)處于靜置狀態(tài)，切忌不時地取出培養(yǎng)瓶觀察生長狀況，這將使原代分離細胞難以貼壁，更談不上伸展和增殖，初學(xué)者尤應(yīng)注意。不必擔心培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分會消耗光，在細胞增殖之前對營養(yǎng)的要求并不大。原代培養(yǎng)初期僅加一薄層培養(yǎng)液的目的也在于有利于細胞貼壁伸展。
(7)消化時間：一般消化至肉眼尚可見微小組織顆粒即可，因為此時組織顆粒已經(jīng)松散，略經(jīng)吹打即成細胞團或單個細胞，過久的消化往往導(dǎo)致細胞損傷加重，細胞培養(yǎng)成活率降低。
(8)其他生長因子：經(jīng)過以上處理，ELISA試劑盒一般原代分離細胞培養(yǎng)均可以成功。對于少數(shù)特殊類型細胞也可以考慮加一些特殊的生長因子，如胰島素能促使細胞攝取葡萄糖和氨基酸。另外，內(nèi)毒素、EGF、FGF等均有促有絲分裂作用，但費用較高。